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一，簡(jiǎn)述

本試驗(yàn)方法是基于當(dāng)實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)操作和試驗(yàn)時(shí)，將吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈暴露在密集的細(xì)菌孢子懸浮液上來(lái)觀察是否有細(xì)菌孢子逸出。在按照制造商的說(shuō)明書(shū)和按照處理危險(xiǎn)生物材料相關(guān)的良好實(shí)驗(yàn)室習(xí)慣進(jìn)行操作時(shí)，設(shè)計(jì)本試驗(yàn)在可能發(fā)生的預(yù)見(jiàn)事件期間，全面考驗(yàn)密封圈的設(shè)計(jì)

二，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)

GB 4793.7—2008附錄AA

IEC61010-2-020:2006

三，設(shè)備構(gòu)成

離心機(jī)（客戶自配）；

試驗(yàn)箱：wan全密封功能，排風(fēng)功能，高效過(guò)濾功能；

熏蒸功能

四，技術(shù)參數(shù)

控制系統(tǒng)：PLC;

操作界面：彩色7寸威綸通，中英文切換；

試驗(yàn)箱：2.8 m3/min 速率抽氣的排風(fēng)扇；

懸浮液：枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢（客戶自備）；

無(wú)菌瓊脂皿10只；

熏蒸劑客戶自備；

五，操作流程

試驗(yàn)懸浮液

試驗(yàn)生物體的孢子的水狀懸浮液即枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢(參見(jiàn) B.atrophaeus Nakamura 或 B.globigii)含≥1×101° spores/mL。

5.1 試驗(yàn)皿

裝有適合試驗(yàn)生物體生長(zhǎng)介質(zhì)的無(wú)菌瓊脂皿。通過(guò)從100 spore/mL～1000   spore/mL 的懸浮液

中取出0. 1 mL, 精度±30%,倒在兩塊瓊脂平板上，在這批瓊脂平板上應(yīng)該能夠培養(yǎng)試驗(yàn)微生物的低 濃度。

5.2 取樣設(shè)備

對(duì)于所有的實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)，取樣設(shè)備包括為取樣表面準(zhǔn)備的用無(wú)菌水弄濕的無(wú)菌棉簽。

5.3 熏蒸設(shè)備

每個(gè)單獨(dú)的試驗(yàn)后，應(yīng)該對(duì)設(shè)備的試驗(yàn)箱及其內(nèi)部進(jìn)行適當(dāng)熏蒸，從而殺死試驗(yàn)懸浮液殘留的孢 子。在試驗(yàn)前通過(guò)確保轉(zhuǎn)頭或試驗(yàn)箱沒(méi)有背景污染來(lái)驗(yàn)證熏蒸的效果。應(yīng)該注意保證在試驗(yàn)進(jìn)行前熏 蒸劑充分揮發(fā)。試驗(yàn)箱的通風(fēng)系統(tǒng)是關(guān)閉的，經(jīng)過(guò)與試驗(yàn)時(shí)間相同的時(shí)間之后，測(cè)量熏蒸劑的濃度。如 果熏蒸劑的濃度可測(cè)得(在23℃甲醛>2.44 mg/m3 的情況下),則要推遲進(jìn)行試驗(yàn)，并繼續(xù)通風(fēng)，直到

濃度下降為止。

注：吸人熏蒸劑是有毒的，應(yīng)該注意避免人員暴露在蒸汽中，并且在蒸汽的后續(xù)處理中也應(yīng)避免人員暴露。

5.4樣品評(píng)價(jià)

在試驗(yàn)皿表面培養(yǎng)所有的菌種。用棉簽擦拭試驗(yàn)皿表面，將該試驗(yàn)皿在37℃下進(jìn)行18 h～24 h 的有氧細(xì)菌培養(yǎng)。通過(guò)橙黃色來(lái)辨認(rèn)枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢菌落，以菌落形成的單位進(jìn)行記錄。

5.5試驗(yàn)規(guī)程

AA.5.1  試驗(yàn)懸浮液的檢查

每次試驗(yàn)之前，將試驗(yàn)懸浮液的適當(dāng)稀釋物涂在試驗(yàn)皿上，立即進(jìn)行試驗(yàn)。

AA.5.2  試驗(yàn)方法

AA.5.2.1  試驗(yàn)次數(shù)

對(duì)每個(gè)吊籃或轉(zhuǎn)頭進(jìn)行三次獨(dú)立的試驗(yàn)，每次獨(dú)立的試驗(yàn)都要對(duì)吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈進(jìn)行試驗(yàn)。 試驗(yàn)前要按照規(guī)定進(jìn)行對(duì)照樣品的取樣。

AA.5.2.2   固定角度的轉(zhuǎn)頭試驗(yàn)方法

將試驗(yàn)懸浮液裝入受試轉(zhuǎn)頭的容器內(nèi)，不加蓋或不密封地放置在轉(zhuǎn)頭的每個(gè)位置。按照制造商的 使用說(shuō)明書(shū)，將所有轉(zhuǎn)頭位置上的容器達(dá)到其額定容量。

用吸管把另外的試驗(yàn)懸浮液小心滴入轉(zhuǎn)頭中間，以模擬一個(gè)“灑落"。如果可能，在沒(méi)有溢出轉(zhuǎn)頭的 情況下，“灑落"量應(yīng)該等于或大于上限為5 mL 的一個(gè)容器的容量，或者對(duì)于具有較大容量容器的轉(zhuǎn) 頭，灑落量應(yīng)該是5 mL 或一個(gè)容器容量的10%,取其較大者。如果使用量小于用來(lái)模擬“灑落"試驗(yàn) 懸浮液的滿容量，則必須做記錄。

如果使用過(guò)濾器作為斜角式轉(zhuǎn)頭的主要防護(hù)模式，那么使用的吊籃密封試驗(yàn)方法。

AA.5.2.3   吊籃密封方法

對(duì)于密封的吊籃和過(guò)濾器，需要一種不同的試驗(yàn)方法。吊籃按其額定容量裝有試驗(yàn)懸浮液。蓋上 蓋子以后，吊籃緩慢倒置兩次，以使試驗(yàn)懸浮液落在吊籃封口內(nèi)側(cè)上。

注：由于吊籃和轉(zhuǎn)頭有多種設(shè)計(jì)，上述試驗(yàn)方法也許不太適合所有的設(shè)計(jì)。在這些情況下可能需要開(kāi)發(fā)其他方法 以達(dá)到同樣的效果，例如按照制造商的說(shuō)明書(shū)考驗(yàn)使用的密封圈。

AA.5.2.4  對(duì)照樣品

每次試驗(yàn)之前進(jìn)行表面取樣來(lái)測(cè)量試驗(yàn)微生物的背景污染。首先，在O型密封圈內(nèi)側(cè)進(jìn)行表面取 樣。在試驗(yàn)懸浮液裝入吊籃或轉(zhuǎn)頭以后，在吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈的整個(gè)外側(cè)進(jìn)行表面取樣，并在離心腔 內(nèi)側(cè)周邊的多個(gè)點(diǎn)進(jìn)行表面取樣，其高度是實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)正在運(yùn)行時(shí)的吊籃或轉(zhuǎn)頭密封圈的高度。當(dāng) 試驗(yàn)一個(gè)密封的吊籃時(shí)，從轉(zhuǎn)頭的表面取樣。對(duì)于密封的吊籃或過(guò)濾器，在吊籃倒置以后，用棉簽對(duì)封 口進(jìn)行附加的取樣。也可在有潛在污染的地方用棉簽取樣。

AA.5.2.5  離心

在取得對(duì)照樣品之后 加速到實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)受試旋轉(zhuǎn)組件的最大轉(zhuǎn)速，并在該轉(zhuǎn)速 保持5 min, 然后減速到停。

實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)停止后，打開(kāi)機(jī)蓋，用棉簽從對(duì)照樣品的取樣部位取樣

AA.5.2.6  消毒

每次試驗(yàn)之后，對(duì)試驗(yàn)箱及其內(nèi)部通過(guò)熏蒸進(jìn)行消毒，對(duì)試驗(yàn)箱用排風(fēng)扇che底通風(fēng)。 對(duì)受試吊籃或轉(zhuǎn)頭按照制造商推薦的方法進(jìn)行消毒。

5.6合格與不合格的標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)頭或吊籃進(jìn)行三次獨(dú)立的、有效的試驗(yàn)。每次獨(dú)立的試驗(yàn)都通過(guò)，才能算作合格，其中任 意一個(gè)單獨(dú)的有效試驗(yàn)不通過(guò)都會(huì)導(dǎo)致整體不合格。

只有在下述兩種情況之一時(shí)試驗(yàn)才有效，加入最大量的附加試驗(yàn)懸浮液，或 者如果離心后立即從密封圈內(nèi)取出菌落形成單位>1×103 的樣本，在同一位置的該樣品的菌落形成單 位大于對(duì)照樣品。

對(duì)于三個(gè)單獨(dú)的試驗(yàn)，離心作用后，通過(guò)擦拭回收的(在吊籃或轉(zhuǎn)頭的密封圈內(nèi)的除外)菌落形成單 位的數(shù)量不得超出在試驗(yàn)前收集的對(duì)照樣品中回收數(shù)量1個(gè)菌落形成單位(在數(shù)量非常低時(shí)，允許采樣 誤差)。如果在任何對(duì)照樣品中檢測(cè)到超過(guò)5個(gè)菌落形成單位的數(shù)量，那么該試驗(yàn)是無(wú)效的，應(yīng)該重新 進(jìn)行試驗(yàn)。